黃萎病是由大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）引起的棉花生长过程中最具毁灭性的病害之一lehu国际乐虎(China)-官方平台网站人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网，严重影响了棉花的产量和品质意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台。探究棉花应答黄萎病菌的分子机制lehu国际乐虎(China)-官方平台网站，发掘抗病基因并将其用于育种kg体育(中国区)-体育官方网站入口EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」，是提高棉花黄萎病抗性最直接和有效的策略fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88kg体育(中国区)-体育官方网站入口。

在植物的免疫反應中娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户kg体育(中国区)-体育官方网站入口lehu国际乐虎(China)-官方平台网站，絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）级联途径“MAPKKK-MAPKK-MAPK”已经被证明在响应病原物入侵过程中发挥了重要作用EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88。MAPKKK类激酶主要分为两类：MEKK-like和Raf-like意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站。在该级联途径中fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，MEKK-like MAPKKKs的功能研究较为清楚beat·365(中文)-唯一官方认证网站，而Raf-like MAPKKKs的功能研究则知之甚少lehu国际乐虎(China)-官方平台网站。此外杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」，大多数MAPK相关研究集中在“MAPKKK-MAPKK-MAPK”级联途径的发掘人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户kg体育(中国区)-体育官方网站入口，而对其下游底物及涉及的分子通路的研究还相对较少娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户。目前对于MAPK下游调控网络在棉花黄萎病应答中的分子机制仍不明确fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88。

6月6日fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88lehu国际乐虎(China)-官方平台网站，南京农业大学棉花遗传与种质创新團隊在《Advanced Science》(IF=14.3)上在线发表了题为“GhMPK9-GhRAF39_1-GhWRKY40a Regulates the GhERF1b-and GhABF2-Mediated Pathways to Increase Cotton Disease Resistance”的最新研究成果^[1]EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」。該研究揭示了棉花GhMPK9-GhRAF39_1-GhWRKY40a磷酸化途徑激活乙烯響應因子GhERF1b的轉錄並促進PR基因表達澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，同時抑制ABA響應基因GhABF2的表達調控氣孔開放EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」，進而促進棉花對黃萎病抗性的分子新機制kg体育(中国区)-体育官方网站入口人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网。諾禾致源为该研究提供了磷酸化修饰蛋白质组检测服务kg体育(中国区)-体育官方网站入口。 

01研究思路

GhMPK9- GhRAF39_1- GhWRKY40a 腅ON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88lehu国际乐虎(China)-官方平台网站？橛糜谔岣呙藁ǘ源罄雎种�菌抗性的模型

02研究結果

研究人員先是通過農杆菌介導的遺傳轉化成功生成了GhMPK9过表达（OE）棉花品系lehu国际乐虎(China)-官方平台网站意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站。在五个OE品系中（OE1、OE2、OE5、OE7、OE10）娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网，GhMPK9的转录水平显著高于野生型（WT）beat·365(中文)-唯一官方认证网站，且生育力、纤维质量和产量均无明显差异杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」。接种V991后人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，与WT相比娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户beat·365(中文)-唯一官方认证网站，GhMPK9过表达品系表现出较轻的病害症状杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，且菌丝积累和真菌恢复能力均明显降低kg体育(中国区)-体育官方网站入口娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户。结果显示娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户beat·365(中文)-唯一官方认证网站，GhMPK9表达水平与抗病性呈剂量相关关系人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台。随后进一步选择OE2和OE10在正常和V991条件下进行转录组分析EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」，发现OE2和OE10在两种条件下均显著上调大量抗病相关基因杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台，如WRKYs、ERFs、NBS-LRRs、PRs、CRKs和P450skg体育(中国区)-体育官方网站入口娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户。总之EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」，过表达GhMPK9可激活植物免疫反应并调节气孔运动EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」，从而增强对大丽花病毒（V. dahliae）的抵抗力EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」。

圖1 GhMPK9基因的克隆与表达分析

研究人員之前在全基因組範圍內鑒定了棉花MAPK家族成员beat·365(中文)-唯一官方认证网站，发现GhMPK9基因在棉花对黄萎病的响应中起重要作用fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88kg体育(中国区)-体育官方网站入口beat·365(中文)-唯一官方认证网站。克隆分析显示GhMPK9与GhMPK13在系统发育上同源于AtMPK3kg体育(中国区)-体育官方网站入口beat·365(中文)-唯一官方认证网站fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88，表达分析显示GhMPK9在根和茎中的表达高于GhMPK13EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台。RT-qPCR结果表明kg体育(中国区)-体育官方网站入口人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台，接种V. dahliae后kg体育(中国区)-体育官方网站入口，易感品种TM-1的MPK9表达显著高于抗病品种H7124澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，表明MPK9在不同棉花品种的免疫中起关键作用fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88。亚细胞定位实验显示GhMPK9定位于细胞核和质膜beat·365(中文)-唯一官方认证网站。通过病毒诱导的基因沉默（VIGS）分析人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网，证实沉默GhMPK9增加棉花对V. dahliae的易感性fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台kg体育(中国区)-体育官方网站入口，进一步验证了GhMPK9在棉花防御响应中的功能人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网。为了研究GhMPK9的生物学功能fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站beat·365(中文)-唯一官方认证网站，作者生成了GhMPK9 RNA干扰（RNAi）株系lehu国际乐虎(China)-官方平台网站fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」，发现这些株系未能产生棉铃和种子澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台beat·365(中文)-唯一官方认证网站，且其雄蕊和雌蕊发育异常澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，表明GhMPK9在棉花生殖发育中同样发挥重要作用EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」kg体育(中国区)-体育官方网站入口。

圖2 GhMPK9、GhRAF39_1和GhWRKY40a之间的互作验证

爲了探究GhMPK9的下游关键调控基因kg体育(中国区)-体育官方网站入口杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台，作者在1458个过表达株系中上调的DEGs中进行了加权基因共表达网络分析（WGCNA）娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网，并引入了之前V991感染陆地棉的转录组数据澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站。通过WGCNA意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台beat·365(中文)-唯一官方认证网站娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，作者鉴定了六个共表达基因娜松�就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网kg体育(中国区)-体育官方网站入口杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台？閒un88·(乐天堂)中国区官网_FUN88意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台，其中GhMPK9和其他468个基因在MEblue娜松�就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」？橹邪拿湃送�泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，于接种后12小时达表达峰值kg体育(中国区)-体育官方网站入口澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，这些基因显著富集于MAPK活性激活、细胞对胁迫的响应和芥子碱生物合成过程中杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台lehu国际乐虎(China)-官方平台网站。作者构建了GhMPK9的共表达网络beat·365(中文)-唯一官方认证网站意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台，发现其中包含多个WRKY转录因子人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站beat·365(中文)-唯一官方认证网站。比较不同RNA-seq样本中这些WRKYs的表达谱fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」，确定GhWRKY40a与GhMPK9表达最为接近意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户。选择GhWRKY40a作为关键候选基因意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台，发现其与GhMPK9在组织表达模式上相似澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88。酵母双杂交（Y2H）和α-半乳糖苷酶活性实验表明GhMPK9与GhWRKY40a互作意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台。双分子荧光互补（BiFC）和GST pull-down实验进一步确认了这种互作娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户。荧光素酶互补成像（LCI）实验也检测到了两者之间的互作信号EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88。然而澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，GhMPK9未能直接磷酸化GhWRKY40akg体育(中国区)-体育官方网站入口fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88。

圖3 GhMPK9、GhRAF39_1和GhWRKY40a在棉花抗病反应中的功能

由于GhWRKY40a并非GhMPK9的直接磷酸化底物lehu国际乐虎(China)-官方平台网站娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，研究人员进行 OE10和WT进行了磷酸化蛋白组分析EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」，以挖掘GhMPK9的下游底物kg体育(中国区)-体育官方网站入口。通过液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网lehu国际乐虎(China)-官方平台网站，共鉴定了4955个磷酸化位点娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，包括3852个丝氨酸位点、989个苏氨酸位点和114个酪氨酸位点意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户kg体育(中国区)-体育官方网站入口，并获得了2312个磷酸化蛋白的4092个磷酸肽beat·365(中文)-唯一官方认证网站意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台。其中澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，1923个稳定磷酸化蛋白在OE10和WT中均被鉴定出来lehu国际乐虎(China)-官方平台网站人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站。差异磷酸化分析发现许多MAPK级联基因在磷酸化水平上存在显著差异beat·365(中文)-唯一官方认证网站娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台，其中GhRAF39明显被激活lehu国际乐虎(China)-官方平台网站。系统发育分析显示棉花基因组中有六个GhRAF39同源基因意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88，具有高度保守的结构域娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，而GhRAF39_1在所有组织和器官中的表达水平最高意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」。基序预测分析表明GhRAF39_1的潜在磷酸化位点可能是Ser27在烟草叶片表皮的亚细胞定位实验显示EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」，GhRAF39_1在正常和接种V991条件下均定位于细胞核和质膜意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台lehu国际乐虎(China)-官方平台网站EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」。为了进一步明确激酶-底物关系beat·365(中文)-唯一官方认证网站lehu国际乐虎(China)-官方平台网站，作者将His和MBP标签加到GhMPK9上澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」，将GST标签加到GhRAF39_1上娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户lehu国际乐虎(China)-官方平台网站人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网。在GST pull-down实验中意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台lehu国际乐虎(China)-官方平台网站，His-GhMPK9蛋白被GST-GhRAF39_1蛋白拉下kg体育(中国区)-体育官方网站入口。在磷酸化实验中lehu国际乐虎(China)-官方平台网站杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台，仅在GST-GhRAF39_1与MBP-GhMPK9共孵育时lehu国际乐虎(China)-官方平台网站kg体育(中国区)-体育官方网站入口，通过自显影显示出清晰的磷酸化带娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户beat·365(中文)-唯一官方认证网站，表明GhMPK9具有激酶活性kg体育(中国区)-体育官方网站入口人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，并在体外通过磷酸化激活了GhRAF39_1 fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，这些结果为理解棉花抗病机制中GhMPK9的作用及其下游调控网络提供了重要线索娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网。

圖4 GhMPK9 与 GhRAF39_1 物理相互作用意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台，并使 GhRAF39_1 磷酸化

在探索棉花細胞內信號傳導機制時意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台lehu国际乐虎(China)-官方平台网站fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88，研究人員通過酵母雙雜交（Y2H）、双分子荧光互补（BiFC）和荧光互补（LCI）实验验证了GhRAF39_1能够与GhWRKY40a相互作用杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台lehu国际乐虎(China)-官方平台网站beat·365(中文)-唯一官方认证网站。GST pull-down实验也显示了GhRAF39_1能有效拉下GhWRKY40a蛋白EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」beat·365(中文)-唯一官方认证网站。另外意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台lehu国际乐虎(China)-官方平台网站娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，GhWRKY40a、GhMPK9和GhRAF39_1都定位于细胞核中lehu国际乐虎(China)-官方平台网站娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户beat·365(中文)-唯一官方认证网站，暗示它们可能作为一个复合体共同作用kg体育(中国区)-体育官方网站入口。GST pull-down实验显示lehu国际乐虎(China)-官方平台网站beat·365(中文)-唯一官方认证网站，GhWRKY40a和GhMPK9都能被GhRAF39_1拉下人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88，证实了它们在细胞核中形成了一个三元复合物kg体育(中国区)-体育官方网站入口澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站。通过Western blot分析娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，当GhMPK9和GhRAF39_1共同存在时杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」，GhWRKY40a显著磷酸化娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，说明GhMPK9-GhRAF39_1膋g体育(中国区)-体育官方网站入口beat·365(中文)-唯一官方认证网站？榧せ盍薌hWRKY40a的磷酸化澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」lehu国际乐虎(China)-官方平台网站。进一步的磷酸化位点分析显示kg体育(中国区)-体育官方网站入口，GhRAF39_1的丝氨酸和苏氨酸位点对GhWRKY40a的磷酸化至关重要娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网kg体育(中国区)-体育官方网站入口。研究人员揭示了GhRAF39_1在GhMPK9介导的GhWRKY40a磷酸化过程中的发挥关键的辅助作用娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台kg体育(中国区)-体育官方网站入口。

圖5 GhWRKY40a 被 GhMPK9- GhRAF39_1 腷eat·365(中文)-唯一官方认证网站人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站？榱姿峄�

爲了探究GhMPK9、GhRAF39_1和GhWRKY40a在棉花抗病反应中的潜在功能娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台，研究人员通过VIGS策略分别沉默了抗病棉花品种Hai7124中的GhMPK9、GhRAF39_1和GhWRKY40a同源基因娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户。研究表明beat·365(中文)-唯一官方认证网站lehu国际乐虎(China)-官方平台网站，棉花品种G. hirsutum对黄萎病易感kg体育(中国区)-体育官方网站入口杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台，而G. barbadense则具有更强的抗病性杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台。作者对比了两个品种的GhMPK9、GhRAF39_1和GhWRKY40a同源基因序列fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网lehu国际乐虎(China)-官方平台网站，发现它们之间没有差异beat·365(中文)-唯一官方认证网站娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户。在实验中kg体育(中国区)-体育官方网站入口澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，沉默GhMPK9、GhRAF39_1和GhWRKY40a的棉花幼苗对黄萎病的抗性显著降低人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网kg体育(中国区)-体育官方网站入口。与对照组相比kg体育(中国区)-体育官方网站入口fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88，这些基因沉默的幼苗在接种黄萎病菌V991后表现出更高的易感性杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台beat·365(中文)-唯一官方认证网站，病情指数显著增加娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，茎部真菌积累也明显增多EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台。这些结果表明fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88，GhMPK9-GhRAF39_1-GhWRKY40a膋g体育(中国区)-体育官方网站入口杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台？樵诘鹘诿藁ǘ曰莆�病的响应中起着关键作用EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网。

圖6 GhMPK9、GhRAF39_1 和 GhWRKY40a 在棉花抗轮纹病中的作用

研究人員爲了一步揭示GhMPK9-GhRAF39_1-GhWRKY40a膌ehu国际乐虎(China)-官方平台网站杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台？樵诿藁�抗黄萎病中的作用机制澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，对基因沉默处理后的棉花幼苗进行了轉錄組測序lehu国际乐虎(China)-官方平台网站杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台。结果显示fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，沉默GhMPK9和GhWRKY40a后beat·365(中文)-唯一官方认证网站澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，许多与乙烯信号转导相关的基因表达显著下调EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」beat·365(中文)-唯一官方认证网站意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台，表明该腷eat·365(中文)-唯一官方认证网站lehu国际乐虎(China)-官方平台网站fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88？橥ü�调控乙烯信号途径增强棉花的抗病性意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台。研究发现fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88，GhERF1b是该膋g体育(中国区)-体育官方网站入口fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台？榈墓丶�下游转录因子人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台。GhWRKY40a可以结合GhERF1b的启动子意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」，并通过GhMPK9-GhRAF39_1膌ehu国际乐虎(China)-官方平台网站杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台？榻榈嫉牧姿峄�显著提高其活性澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站。VIGS分析证实EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」kg体育(中国区)-体育官方网站入口娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，沉默GhERF1b后人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，棉花对黄萎病的抵抗力显著下降EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」kg体育(中国区)-体育官方网站入口，真菌积累增加人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网，多个抗病基因的表达下调fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网，从而增强了棉花对黄萎病的抗性fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户。

圖7 GhMPK9-GhRAF39_1介导的GHWRKY40磷酸化提高棉花对黄萎病的抗性

在分析GhMPK9過表達轉基因棉花的轉錄組數據時kg体育(中国区)-体育官方网站入口fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88，發現GhMPK9過表達可調控氣孔發育和分布杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88。氣孔通過介導氣體交換和水汽調節植物的內部溫度和濕度娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，這直接影響黃萎病菌的感染程度EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」。研究顯示杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台，GhMPK9、GhRAF39_1和GhWRKY40a都參與了棉花氣孔的開閉調節lehu国际乐虎(China)-官方平台网站意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」。分析發現澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站lehu国际乐虎(China)-官方平台网站，GhMPK9過表達棉花中GhABF2蛋白顯著減少娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，而GhWRKY40a可以直接結合GhABF2的啓動子區杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台lehu国际乐虎(China)-官方平台网站，從而抑制其轉錄活性人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网。GhABF2作爲負調控因子澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站beat·365(中文)-唯一官方认证网站杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台，其沈默後意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台，棉花的病葉率降低意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台lehu国际乐虎(China)-官方平台网站，失水率增加lehu国际乐虎(China)-官方平台网站人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网，莖部真菌積累減少娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户意昂4体育(中国)数字娱乐技术创新平台kg体育(中国区)-体育官方网站入口。這表明GhMPK9-GhRAF39_1介導的GhWRKY40a磷酸化抑制了GhABF2的表達澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站kg体育(中国区)-体育官方网站入口，從而誘導氣孔打開杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，降低植物內部濕度娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台，增強棉花的抗黃萎病能力beat·365(中文)-唯一官方认证网站人生就是博·AG尊时凯龙(中国区)集团官网。

圖8 GhMPK9-GhRAF39_1介导的GhWRKY40a磷酸化降低了其结合GhABF2启动子的能力kg体育(中国区)-体育官方网站入口娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户，而提高了棉花对黄萎病的抵抗力

03研究結論

本研究通過磷酸化蛋白質組學揭示了棉花應答黃萎病菌的分子機制：GhMPK9-GhRAF39_1-GhWRKY40a磷酸化途徑激活乙烯響應因子GhERF1b的轉錄並促進PR基因表達EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」beat·365(中文)-唯一官方认证网站，同時抑制ABA響應基因GhABF2的表達調控氣孔開放杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台，促進棉花對黃萎病抗性fun88·(乐天堂)中国区官网_FUN88。這一發現爲棉花抗黃萎病機制研究、基因篩選和育種改良以及生物控制策略的制定提供了重要的線索和依據澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站kg体育(中国区)-体育官方网站入口娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户。這些發現有助于深入了解棉花的抗病機制澳门人威泥斯娱乐官方网站(中国)集团娱乐官方网站，並爲解決黃萎病問題提供了新的思路和方法EON5-意昂5Kgame「强保障平台,更省心注册」。

04小編推薦

翻譯後修飾之王：諾禾致源磷酸化修饰蛋白质组

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全面分析：磷酸化修飾位點激酶預測、低物特征集注釋、基于修飾位點基序分析

應用領域：

疾病研究：揭示磷酸化在癌症、神經退行性疾病等中的作用機制

藥物研發：篩選和驗證藥物靶點娱乐中心—注册大厅（官网）娱乐中心 -我的账户杏鑫平台|杏鑫娱乐-杏鑫登录-杏鑫官方平台，提高藥物開發效率

農業研究：研究植物抗逆性和生長調控中的磷酸化機制



參考文獻：Mi X, Li W, Chen C, Xu H, Wang G, Jin X, Zhang D, Guo W. GhMPK9-GhRAF39_1-GhWRKY40a Regulates the GhERF1b- and GhABF2-Mediated Pathways to Increase Cotton Disease Resistance. Adv Sci (Weinh). 2024 Jun 6:e2404400.