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科技服務

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轉錄調控測序

Ribo-seq—核糖體印記測序

核糖体印记测序(Ribosome profiling sequencing)是指对与核糖体结合的正在翻译的RNA片段进行测序qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口,来准确获取样本中所有可翻译分子(mRNA和其他潜在的可翻译RNA如lncRNA, circRNA等)的信息DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网welcome-球速体育-直播认证官方网站PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAce。Ribo-seq可以研究细胞内基因翻译的区域、水平、速率等澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口,与转录组、蛋白质组以及ncRNA测序等进行關聯分析qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAceDB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网,可以揭示转录后调控网络以及识别新的蛋白质编码基因PG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站kg体育·(中国China)官方网站welcome-球速体育-直播认证官方网站。
  • 1.Ribo-seq技術原理

    该技术利用蛋白酶抑制剂瞬时捕获住处于翻译过程的多聚核糖体与RNA链复合物DB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网,再通过RNA酶消化细胞中的RNAwelcome-球速体育-直播认证官方网站,得到被核糖体保护的正在翻译的RNA片段(Ribosome Protected Fragmentwelcome-球速体育-直播认证官方网站澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站,RPFs)qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口,然后对这些被核糖体保护的30nt左右的RNA片段进行富集、深度测序、定量分析PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAcelong8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口welcome-球速体育-直播认证官方网站。
  • 2.Ribo-seq技術優勢

高靈敏度與分辨率:Ribo-seq能夠在單堿基分辨率下檢測全基因組的翻譯活動DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网,提供了極高的靈敏度和精確度意昂体育·[官方网]有限公司官网welcome-球速体育-直播认证官方网站澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站。
瞬時性與定量性:Ribo-seq能夠瞬時地捕獲翻譯過程中的狀態澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAce,並定量地分析翻譯水平意昂体育·[官方网]有限公司官网long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口PG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站。
全局性與系統性:Ribo-seq能夠同時檢測細胞內數千種基因的翻譯活動kg体育·(中国China)官方网站qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口,爲構建全局性的翻譯圖譜提供了可能DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站。此外結合RNA-seq等數據PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAce,還可以系統地研究基因表達與翻譯調控之間的關系PG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAce。

應用方向與場景

  • 應用方向:

    Ribo-seq最初在釀酒酵母中應用PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAce,目前已廣泛應用在動物、植物和微生物的研究中DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网DB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网意昂体育·[官方网]有限公司官网。 醫學領域:幹細胞分化以及組織器官發育機制研究、腫瘤發生發展研究、疾病發生以及耐藥性研究、免疫方向研究
    農學領域:植物抗逆性研究、植物生長發育研究、遺傳育種研究、差異性狀研究

  • 應用場景:

  • 1. 基因表达水平的研究:基因在翻譯水平上的表達情況(翻譯全局景觀)、基因的翻譯效率(與轉錄組聯合分析)
    2. 翻译调控机制的研究:基因内部翻译调控机制(翻译扫描welcome-球速体育-直播认证官方网站DB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网意昂体育·[官方网]有限公司官网,翻译停滞澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站,翻译重启)、影响翻译效率的调控机制(翻译起始因子PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAcePG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站,miRNA降解long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口PG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站welcome-球速体育-直播认证官方网站,uORF )
    3.發現新小肽:lncRNA新可翻译分子、circRNA新可翻译分子、pri-small RNA的可翻译性

諾禾致源优势

  • 1. 周期快、质量好kg体育·(中国China)官方网站,稳定性高

    諾禾致源Ribo-seq采用先进的Illumina平台测序PG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站,并与高性能计算平台(High Performance Computingkg体育·(中国China)官方网站澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAce,HPC)结合qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口,实现快速、稳定的测序数据分析及交付welcome-球速体育-直播认证官方网站。交付周期<65天意昂体育·[官方网]有限公司官网long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网。
    • <30

      樣本量
    • 65天周期

      50天極致周期
    • Illumina

      測序平台
  • 2. 方案设计专业澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站,质控严格

    針對動物細胞、動/植物組織、RPFs中間産物DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网意昂体育·[官方网]有限公司官网,設計不同的項目方案澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站PG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站,調整實驗protocollong8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口kg体育·(中国China)官方网站澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站,每一步都科學、缜密的設計long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口,以保障高質量研究成果kg体育·(中国China)官方网站澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站。

    材料選取

    RPFs

    文庫構建
    Ribo文庫

    SE50測序

    信息分析

  • 3. 项目文章以及物种经验丰富

    諾禾致源項目經驗涉及人、大小鼠、鸡、山羊、猪、海产动物等细胞和组织样本;拟南芥、杨树、烟草、番茄、菊花、玉米、大豆、水稻、棉花等植物组织样本;疟原虫、昆虫样本;以及RPFs建库中间产物样本;助力客户在Nucleic Acids Research、Science Advance等权威杂志发表多篇高水平文章PG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站。
    • 80人

      分析團隊
    • 5年

      項目經驗
    • 500+

      結題項目
    • 1對1

      項目服務

信息分析

諾禾致源Ribo-seq信息分析包括标准分析流程和個性化分析流程long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口kg体育·(中国China)官方网站。
標准分析流程:該部分包括Ribo-seq單組學分析以及與mRNA-seq數據進行關聯分析(如無mRNA-seq數據意昂体育·[官方网]有限公司官网long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口kg体育·(中国China)官方网站,則不呈現翻譯效率等分析內容)qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口welcome-球速体育-直播认证官方网站DB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网。
個性化分析流程:該部分爲Ribo-seq與ncRNA-seq、蛋白質組關聯分析qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口。
Ribo-seq單組學分析包括基因翻譯水平定量分析、翻譯水平差異分析以及翻譯相關位點分析DB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网welcome-球速体育-直播认证官方网站,此部分展示如下:
意昂体育app下载安装官网 定量水平分析
樣本相關性分析
差異分析
差異基因功能富集分析
翻譯位點分析:
P-site分析
ORF分析
uORF分析

關聯分析

諾禾致源搭建了内容丰富的Ribo-seq多组学關聯分析流程kg体育·(中国China)官方网站DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口,以助力科研者们展开深入研究long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口。主要内容为mRNA-seq關聯分析、ncRNA-seq關聯分析、蛋白质组關聯分析PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAce。
Ribo-seq与mRNA關聯分析 翻譯效率分析(TE)
差異TE基因統計、富集分析
mRNA與RPF相關性分析
mRNA与RPF的表达水平差异比较關聯分析
Ribo-seq与ncRNA關聯分析 sORF的鑒定
sORF核糖體釋放得分
表達量/翻譯水平分析:
具有sORF的ncRNA的轉錄組定量和差異水平展示
具有sORF的ncRNA的翻譯組定量和差異水平展示
具有sORF的ncRNA的翻譯效率和差異水平展示
Ribo-seq与蛋白质组關聯分析 翻譯組與蛋白質組相關性分析
翻译组与蛋白质组表达水平差异比较關聯分析

送樣建議

樣本類型 送樣建議 預處理
新鮮動物組織 ≥300mg RNase free 水漂洗以去除污物澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站kg体育·(中国China)官方网站, 剔除结缔组织、毛发等非研究组织
新鮮植物組織 ≥300mg RNase free 水冲洗表面welcome-球速体育-直播认证官方网站qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口PG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站,吸水纸吸干样品表面
新鮮培養細胞數量 5×10 6 细胞活性 90%以上,使用放线菌酮固定后long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口,收集细胞
RPF ≥200ng/μllong8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口kg体育·(中国China)官方网站PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAce,5μl 以上 過柱法、蔗糖梯度離心收集或其他方式處理

常見問題

  • 1.同時想做Ribo-seq和mRNA-seqkg体育·(中国China)官方网站澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站,應該怎麽送樣澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网?

    • 如果同時進行轉錄組與Ribo-seq分析PG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站,需准備兩份樣品:
      (1)ribo-seq:样本不管是细胞还是组织(保持细胞组分完整性)DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网DB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网,不能加trizolDB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网PG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口,不需要提取total RNA!
      (2)ribo-seq:細胞樣本送樣前welcome-球速体育-直播认证官方网站,需要用放線菌酮進行處理DB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网,保持特定狀態(研究瞬時性)DB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网welcome-球速体育-直播认证官方网站kg体育·(中国China)官方网站。
      (3)mRNA-seq:请根据转录组送样要求另外准备样本(不需要防线菌酮处理welcome-球速体育-直播认证官方网站PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAce,不能用裂解液处理welcome-球速体育-直播认证官方网站DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网,裂解液处理的细胞/组织样本不能再进行total RNA的提葁elcome-球速体育-直播认证官方网站qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口。﹍ong8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口。
  • 2.在片段分布的分析中澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口,21-24nt有峰值意昂体育·[官方网]有限公司官网DB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网,代表什麽PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAcelong8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站?

    • 用于Ribo-seq测序的目标RNA片段约为30nt左右DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网welcome-球速体育-直播认证官方网站qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口,不同物种及样本处理会导致目标片段稍有变化welcome-球速体育-直播认证官方网站,一般为26-32ntkg体育·(中国China)官方网站。在多数文献中qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口,为26-32nt的mRNA片段富集DB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAcePG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站, 但是已有文献研究表明long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口kg体育·(中国China)官方网站,在tRNA缺乏的情况下welcome-球速体育-直播认证官方网站,有可能导致核糖体复合物A位点的空置qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口,该状态富集的mRNA片段约为21-24ntDB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网。我们在进行后续翻译状态研究时qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口,可根据实验目的对25-33nt或者20-40nt的数据进行分析 [1]welcome-球速体育-直播认证官方网站PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAce。
  • 3.P-site(三堿基周期性)數據的特性有哪些qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口kg体育·(中国China)官方网站DB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网?

    • 由于核糖体在转录本滑动翻译蛋白的过程中DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站DB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网,会每隔 3個碱基(1個密码子)产生一個停顿long8·龙8·(国际版)头号玩家唯一官方网站入口kg体育·(中国China)官方网站,完成一個氨基酸的肽段延伸DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口。我们将比对到 CDS 区的RPF进行分布位置统计welcome-球速体育-直播认证官方网站意昂体育·[官方网]有限公司官网, 一般而言起始密码子上游或终止密码子下游不会被翻译或翻译丰度极低kg体育·(中国China)官方网站qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口,因此对应的RPF信号整体弱于编码区DB旗舰·(中国区)官方app网站有限公司官网qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口。其次基于Ribo-seq的建库原理PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAcewelcome-球速体育-直播认证官方网站PG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站,大部分的核糖体在mRNA上 的足迹是3的整数倍PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAce,大部分RPF 信号在CDS区是呈现三碱基周期性PA视讯(中文站) - 官方网站PlayAcewelcome-球速体育-直播认证官方网站。最后PG电子「中国china」官方网站-PG平台门户网站qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站,理论上RPF 5’端比对位置开始于起始密码子上游 12~13nt澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站qy千亿-千亿(国际)唯一官方网站登录入口意昂体育·[官方网]有限公司官网,停止于终止密码子上游 15nt左右 的位置DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网澳·门人威·尼·斯·娱·乐·(中国)集团娱乐官方网站,而mRNA-seq 的数据是随机分布的意昂体育·[官方网]有限公司官网DB真人旗舰·(中国官方)集团有限公司官网。

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