三、研究結論

• 1.阿克曼菌通過減輕全身炎症來保護宿主免受SFTSV感染

  對260例SFTS患者(存活患者爲SF-S組U8国际·[China]有限公司官网，死亡患者爲SF-D組)、176例非SFTSV發熱患者(非SF)和19例健康對照(HC)的糞便進行16SrRNA測序杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口。結果發現杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口，與HC組相比杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口U8国际·[China]有限公司官网，SF-S組中阿克曼菌、豐度顯著增加杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口龙8-long8·(国际)唯一官方网站PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰，而與SF-S組相比PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光，SF-D組中只有阿克曼菌顯著減少（圖1a-d）PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网。相比而言熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台，SF-S組相比SF-D組的血清促炎症細胞因子IL-1β、IL-6和腫瘤壞死因子-α的表達顯著降低意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光，其濃度與阿克曼菌的相對豐度呈負相關(圖1e)杏宇娱乐-杏宇注册登录平台U8国际·[China]有限公司官网。將4例SFTSV感染恢複期患者(高豐度AKK)或3例死于SFTSV感染的患者(低豐度AKK)的糞便樣本移植于四聯抗生素清除腸道菌群的(ABX)小鼠中龙8-long8·(国际)唯一官方网站杏宇娱乐-杏宇注册登录平台U8国际·[官方网]有限公司官网，其存活率顯著提高(圖1g)杏宇娱乐-杏宇注册登录平台U8国际·[China]有限公司官网。降低IL1b和IL6的表達龙8-long8·(国际)唯一官方网站熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网，其肺、肝和脾的組織損傷均得到改善(圖1h、i)杏宇娱乐-杏宇注册登录平台PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰。 图1 阿克曼菌通过减轻全身炎症来保护宿主免受SFTSV感染分析

• 2.阿克曼菌介導初級膽汁酸産生通過抑制全身炎症反應保護宿主免受SFTSV感染

  对来自SF-S组(n=222)、SF-D组(n=21)和非SF组(n=132)的405份血清样本进行了非靶向代謝組學分析杏宇娱乐-杏宇注册登录平台熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台，鉴定到SF-S组和非SF组之间差异代谢物69种杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网，SF-S和SF-D组之间差异代谢物153种（图2a）PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光。这些物质中杏宇娱乐-杏宇注册登录平台U8国际·[官方网]有限公司官网QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网，SF-S组与另两组相比U8国际·[China]有限公司官网杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网U8国际·[官方网]有限公司官网，鹅去氧胆酸(CDCA)、鹅去氧胆酸(GCDCA)、鹅去氧胆酸(TCDCA)和牛磺酸脱氧胆酸(TDCA)等系列胆汁酸（BAs）显著增加(图2b)QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台U8国际·[官方网]有限公司官网。此外熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台，高GCDCA血清浓度与粘液弧菌相对丰度的增加呈正相关U8国际·[China]有限公司官网PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰杏宇娱乐-杏宇注册登录平台，与血清中IL-1β和IL-6的表达呈负相关（图2c、d）杏宇娱乐-杏宇注册登录平台熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台。与未治疗的对照组相比龙8-long8·(国际)唯一官方网站QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网，三名接受GCDCA治疗的急性SFTS患者的外周血单核细胞（PBMC）表现出IL1B（但不是IL6）的表达显著降低PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰，而CDCA将IL1B的表达增加了2.5倍（图2e）杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网。作者用CDCA或GCDCA对五名健康捐献者的PBMC提取物进行了预处理U8国际·[China]有限公司官网杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口U8国际·[官方网]有限公司官网，发现经CDCA预处理的PBMC中IL-1β和IL-6的表达显著降低杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网U8国际·[官方网]有限公司官网QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网，与未处理的对照相比意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台，感染后的病毒复制显著减少（图2f、g）QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网。TCDCA预处理还导致IL1B和IL6转录本显著降低U8国际·[官方网]有限公司官网熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台龙8-long8·(国际)唯一官方网站，而TDCA预处理显著增加促炎细胞因子的表达（图2h）PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网U8国际·[官方网]有限公司官网。 图2 存活的SFTSV感染者血清GCDCA和TCDCA增加对PBMC炎症抑制分析 后使用SFTSV感染PBS、ABX或阿克曼菌定植的ABX小鼠杏宇娱乐-杏宇注册登录平台熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台U8国际·[China]有限公司官网，对其血清样本进行非靶向代謝組學分析杏宇娱乐-杏宇注册登录平台PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰。PBS或阿克曼菌定植小鼠的差异代谢物富含胆汁分泌和胆固醇代谢（3a）杏宇娱乐-杏宇注册登录平台。GCDCA和一系列牛磺酸结合的BAsQY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口，包括TCDCA、牛磺胆酸(TCA)、TDCA和牛磺胆酸盐-α-MCA(T-α-MCA)杏宇娱乐-杏宇注册登录平台U8国际·[官方网]有限公司官网U8国际·[China]有限公司官网，在定植阿克曼菌的小鼠血清中的相对丰度显著增加(3b、c)U8国际·[官方网]有限公司官网熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台。其中PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光，GCDCA和TCDCA显著下调感染SFTSV的小鼠PBMC中IL6、IL1b和TNFa的表达(3d)QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网。在ABX小鼠的饮用水中给予TCDCA 4周QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网， TCDCA治疗显著提高了其血清浓度QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网U8国际·[官方网]有限公司官网，并将感染ABX小鼠的死亡率降低了40%（3e）U8国际·[官方网]有限公司官网PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰。此外杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网，TCDCA治疗组小鼠的促炎细胞因子表达显著减少杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网，组织损伤减轻（3f-h）PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰U8国际·[China]有限公司官网。 图3 阿克曼菌介导初级BA-TDCA保护宿主抑制SFTSV感染分析

• 3.阿克曼菌代謝物HAL通過上調肝細胞氨基乙酰轉移酶（BAAT）表達抑制SFTSV感染引起的全身炎症反應

  肝細胞通過膽固醇羟基化合成初級BAs杏宇娱乐-杏宇注册登录平台，生成膽酸和CDCAU8国际·[China]有限公司官网意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰，然後通過膽汁酰輔酶A合成酶(BACS)和BAAT23與甘氨酸或牛磺酸結合杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰。關于阿克曼菌定植對TCDCA/GCDCA生物合成的影響U8国际·[China]有限公司官网龙8-long8·(国际)唯一官方网站杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口，確定了BAAT的表達明顯增強(4a)QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网杏宇娱乐-杏宇注册登录平台意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光。由于路氏乳杆菌定植不能保護ABX小鼠免受SFTSV感染U8国际·[官方网]有限公司官网QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网U8国际·[China]有限公司官网，使用路氏乳杆菌作爲無關對照U8国际·[China]有限公司官网杏宇娱乐-杏宇注册登录平台，其小鼠的肝髒中未檢測到BAAT的水平上調(4b)杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网U8国际·[官方网]有限公司官网。
  爲了研究細菌代謝産物介導的BAAT增強熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网，作者通過對阿克曼菌在腦心輸液中的培養上清液的非靶向代謝組分析QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口。分析發現PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台U8国际·[官方网]有限公司官网，HAL以劑量依賴的方式在Huh-7細胞系和小鼠原代肝細胞(MPH)中誘導明顯更高的BAAT水平(4d、e)杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网。HAL和CDCA聯合作用于MPHs時意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网，CDCA濃度顯著降低意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光杏宇娱乐-杏宇注册登录平台，而TCDCA濃度顯著升高熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台U8国际·[官方网]有限公司官网杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网。當靶向BAAT的小幹擾RNA被轉染到MPH中時杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网U8国际·[China]有限公司官网龙8-long8·(国际)唯一官方网站，該表型消失杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口U8国际·[官方网]有限公司官网，說明牛磺酸結合的代謝活動是由HAL以BAAT依賴的方式驅動的（4f）QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网。與未經處理的ABX小鼠相比QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光龙8-long8·(国际)唯一官方网站，HAL顯著增加了BAAT在ABX動物肝組織中的表達（4g）龙8-long8·(国际)唯一官方网站杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网杏宇娱乐-杏宇注册登录平台。經HAL處理的ABX小鼠或GF小鼠的血清TCDCA水平顯著增加杏宇娱乐-杏宇注册登录平台U8国际·[官方网]有限公司官网。進一步的體內保護實驗表明杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口U8国际·[China]有限公司官网龙8-long8·(国际)唯一官方网站，HAL處理的ABX小鼠顯示出更高的存活率QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口，炎症因子和組織病理變化均明顯改善(4h-j)杏宇娱乐-杏宇注册登录平台。因此表明HAL在微生物區系缺乏的情況下發揮了抗SFTSV的作用PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光。 图4 阿克曼菌代谢产物HAL介导BAAT表达分析

• 4.BA GCDCA以依赖BA受体TGR5的方式抑制NF-κB介导的炎症反应

  爲了研究GCDCA抑制SFTSV誘導的炎症的分子機制熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台，作者使用了人類細胞模型THP-1細胞龙8-long8·(国际)唯一官方网站U8国际·[China]有限公司官网杏宇娱乐-杏宇注册登录平台。研究發現GCDCA以劑量依賴和病毒複制無關的方式顯著下調感染SFTSV的THP-1細胞中IL-1β和IL-6的表達杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口，而CDCA顯著上調IL-1B和IL-6（5a-c）U8国际·[China]有限公司官网熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台。對經GCDCA預處理或未經GCDCA處理的SFTSV感染的THP-1細胞進行了轉錄組分析杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光杏耀平台|杏耀注册|杏耀登录|杏耀官网，在GCDCA預處理、SFTSV1感染的κ-1細胞中PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰U8国际·[China]有限公司官网意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光，NF-THPVB信號通路中的幾個基因顯著下調杏宇娱乐-杏宇注册登录平台PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰U8国际·[官方网]有限公司官网，包括RELA和NFKB1（5d、e）PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰杏宇娱乐-杏宇注册登录平台。進一步證明U8国际·[China]有限公司官网U8国际·[官方网]有限公司官网，GCDCA預處理顯著降低了細胞質和細胞核中p50亞基和p65亞基的磷酸化形式(p-p65)的水平PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰，並以MyD88信號不依賴的方式特異性地降低了細胞核中的p65水平（5f）PA视讯(亚洲区)官方网站-PlayAce AG旗舰QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网。爲了確定GCDCA在SFTSV感染背景下用來傳遞抗炎反應的受體意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光杏宇娱乐-杏宇注册登录平台龙8-long8·(国际)唯一官方网站，用小幹擾RNA抑制了TGR5和FXRQY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网龙8-long8·(国际)唯一官方网站，然後GCDCA治療和SFTSV感染熊猫体育中国app官网下载地址（官方）认证体育赛事直播平台，在TGR5耗盡後杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口U8国际·[官方网]有限公司官网，GCDCA處理的細胞與未處理的對照細胞相比U8国际·[官方网]有限公司官网意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光，P50和p-P65蛋白水平的差異也消失(5h)杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口U8国际·[官方网]有限公司官网QY球友会·QY千亿球友会·QY球友会体育官网。體內實驗杏宇娱乐-杏宇注册登录平台杏耀平台代理注册(官方)网站/网页版登录入口U8国际·[China]有限公司官网，阿克曼菌定植後杏宇娱乐-杏宇注册登录平台，TGR5?/?小鼠的病死率沒有恢複(5i、j)意昂体育4凯捷 -〈官方认证〉意昂4凯捷登录即享,美好时光杏宇娱乐-杏宇注册登录平台。 图5 GCDCA通过TGR5抑制NF-κB介导的炎症反应信号